工藝操作要點
菌種分離篩選流程：采樣→增殖培養(yǎng)→平板分離→初篩-復(fù)篩-發(fā)酵實驗（終篩）→菌種保藏
采樣采樣就是從自然界中采集含有目的菌的樣品。


研究菌種從蜂蜜原料中采集、篩選。考慮到今后工業(yè)化生產(chǎn)主要原料為油菜花蜂蜜因此本研究從油菜花蜂蜜中直接采樣。
增殖培養(yǎng)無菌條件下取5mL油菜花蜂蜜接種到已配制好的蜂蜜培養(yǎng)基中，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中15℃
150rmin培養(yǎng)30d培養(yǎng)過程定期觀察并記錄。
平板分離將經(jīng)增殖培養(yǎng)的樣品進行適當稀釋，涂布麥汁瓊脂平板，置于恒溫培養(yǎng)箱中25℃培養(yǎng)，定期觀察并記錄。
初篩挑取80株經(jīng)過二次平板分離的酵母菌株采用艾氏管法測定其發(fā)酵能力每株菌接種1管，保留發(fā)酵能力較高的菌株20株。
復(fù)篩將選取的20株酵母菌再次接種艾氏管每株3管，測試其發(fā)酵能力，保留4株發(fā)酵能力較高的菌株。
發(fā)酵試驗：將復(fù)篩得到的4株酵母菌株接種于蜂蜜培養(yǎng)基28℃恒溫培養(yǎng)30d在發(fā)酵后期不斷對各個樣品進行感官品評同時進行部分理化指標的檢測并不斷觀察記錄。從中篩選出性能良好、適宜大生產(chǎn)的菌株1-2株。菌種的保藏將篩選得到的菌株接種于麥汁斜面置28℃恒溫箱中培養(yǎng)24h置4C冰箱中保存。
菌種的鑒定：選取篩選得到的2株發(fā)酵能力較強的酵母菌參照《酵母菌的特征與鑒定手冊》進行菌種鑒定1具體方法：
（1）細胞形態(tài)接種麥芽汁液體培養(yǎng)基28℃、150r/min培養(yǎng)24h制備水浸片顯微鏡檢觀察菌體形態(tài)。并通過電子顯微鏡觀察其菌體形態(tài)測定其細胞大小。
（2）菌落形態(tài)觀察將待測菌株在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上平板劃線28℃培養(yǎng)觀察菌群形態(tài)特征。
（3）糖類發(fā)酵測定將欲鑒定的菌株分別接種于酵母碳源發(fā)酵管中25℃-28℃培養(yǎng)每天觀察結(jié)果。一般觀察2d-3d即可凡不發(fā)酵者或弱發(fā)酵者，可延長至觀察5d
（4）碳源同化試驗菌液制備將待測菌株制成菌懸液
（1mL無菌生理鹽水接入約1接種環(huán)的新培養(yǎng)的酵母菌制成的菌懸液）
平板制備將此菌懸液全部倒入經(jīng)熔化并冷卻至45℃左右的同化碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中使菌體在培養(yǎng)基中混和均勻靜置凝固后在28℃把培養(yǎng)皿倒置幾小時，使表面不致太濕。點樣在培養(yǎng)皿底部做上碳源名稱的標記分別用無菌不銹鋼匙或無菌藥匙按標記加糖少許（約米粒大）如結(jié)果不明顯可于第2d再補加一次糖。
觀察觀察結(jié)果時以葡萄糖作對照，一般是25℃-28℃培養(yǎng)1d-2d觀察結(jié)果凡能同化者在所加碳源的周圍形成生長圈。凡生長緩慢的酵母或是在測半乳糖同化時，可適當采用液體培養(yǎng)法，即在含某種碳源的液體培養(yǎng)基中接入酵母25℃-28℃培養(yǎng)1-2周以含葡萄糖的液體培養(yǎng)基作對照觀察酵母生長情況是否更加渾濁或形成環(huán)、島等必要時可延長至觀察3周。
（5）氨源同化試驗培養(yǎng)基的制備是將酵母菌無氮合成培養(yǎng)基熔化取無菌試管4支加入已熔的培養(yǎng)基5mL然后向其中的2只加入硝酸鉀滅菌制成斜面。
接種、培養(yǎng)將4支斜面培養(yǎng)基中都接入供試菌（2支沒有氮源的斜面試管作對照）置于28℃恒溫培養(yǎng)觀察。能觀察到菌體生長現(xiàn)象表明菌株可以同化該氮源。
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